Cette Ligne directrice décrit deux méthodes. Ces tests sont applicables uniquement à des substances insolubles dans l’eau (solubilité < 10-6g/l).
La première (méthode A) sert à fournir des informations sur le transport et la sédimentation de particules insolubles dans l’eau et l’air. Il y a plusieurs méthodes standards disponibles qui répondent aux conditions de sensibilité : la sédimentation, la centrifugation ou le compteur Coulter. L'échantillon est soumis à un examen au microscopique à lumière ordinaire pour déterminer la nature approximative de ses particules. Des données sont obtenues pour 3 domaines de taille différents : > 200 µm, < 2 µm et de 2 à 200 µm. La méthode A, qui détermine le rayon hydrodynamique effectif Rs (seulement pour 2 μm < Rs < 100 μm), sera utilisée pour les produits particulaires qu'ils soient fibreux ou non fibreux.
La méthode B est employée dans le cas spécial des matériaux qui peuvent prendre la forme de fibre ; elle est plus spécialisée, peu fréquemment requise et implique un examen microscopique. La microscopie électronique de balayage (MEB) ou de transmission (MET) sont exigées. Il n'y a aucun procédé standard actuellement. La longueur totale (l) et le diamètre (d) des fibres de d≥ 0.1µm et l≥ 5µm sont demandés. Deux histogrammes sont préparés basés sur l'examen d’au moins 50 fibres chacun.
Cette Ligne directrice décrit les méthodes permettant la détermination des constantes de dissociation dans l'eau. La dissociation est le partage réversible en deux ou plusieurs espèces chimiques qui peuvent être ioniques.
La détermination de la constante de dissociation exige une mesure des concentrations des formes dissociées et non dissociées de la substance chimique. A partir d'une connaissance de la stoechiométrie de la réaction de dissociation la constante appropriée peut être déterminée. Dans le cas particulier décrit dans cette directive, la substance se comporte comme acide ou base, et il est plus facile d’effectuer la détermination en mesurant les concentrations relatives des formes ionisées et non-ionisées de la substance et le pH de la solution. Le rapport entre ces termes est donné dans l'équation donnant le pKa. Quelques composés montrent plus d'une constante de dissociation. Certaines des méthodes décrites sont également appropriées aux dissociations non-acide/basse. Il y a deux façons de déterminer le pKa. L’une consiste à titrer une quantité connue de substance par un acide ou une base de référence selon le cas; l'autre consiste à déterminer les concentrations relatives des formes ionisées et non-ionisées ainsi que leurs variations en fonction du pH. Les méthodes basées sur ces principes peuvent être classées comme procédures de titration, spectrophotométriques et conductimétriques.This Test Guideline for reproduction testing is designed to provide general information concerning the effects of a test substance (Solid, liquid, gas or vapour) on male and female reproductive performance. The test substance is administered orally in graduated doses to several groups of males and females.
Males should be dosed during growth and for at least one complete spermatogenic cycle; females of the Parent generation should be dosed for at least two complete oestrous cycles. The animals are then mated. The test substance is administered to both sexes during the mating period and thereafter only to females during pregnancy and for the duration of the nursing period. This Test Guideline is intended primarily for use with the rat or mouse. Each test and control group should contain a sufficient number of animals to yield about 20 pregnant females at or near term. Three test groups, at least, should be used. It is recommended that the test substance be administered in the diet or drinking water. A limit test may be performed if no effects would be expected at a dose of 1000 mg/kg bw/d. The results of this study include measurements (weighing, food consumption) and daily and detailed observations, each day preferably at the same time, as well as gross necropsy and histopathology. The findings of a reproduction toxicity study should be evaluated in terms of the observed effects, necropsy and microscopic findings. A properly conducted reproduction test should provide a satisfactory estimation of a no-effect level and an understanding of adverse effects on reproduction, parturition, lactation and postnatal growth.
Dominant lethal (DL) effects cause embryonic or foetal death. Induction of a dominant lethal event after exposure to a test substance (liquid, solid, vapour or gas, …) indicates that the substance has affected germinal tissue of the test species. Dominant lethals are generally accepted to be the result of chromosomal aberrations (structural and numerical anomalies), but gene mutations and toxic effects cannot be excluded.
This Test Guideline recommends rats or mice as the test species. Generally, male animals are exposed to the test substance and mated to untreated virgin females. The most widely used is the single administration of the test substance by oral or by intraperitoneal injection. Normally, three dose levels should be used. The various germ cell stages can be tested separately by the use of sequential mating intervals. The females are sacrificed after an appropriate period of time, and the contents of the uteri are examined to determine the numbers of implants and live and dead embryos. The calculation of the dominant lethal effect is based on comparison of the live implants per female in the treated group to the live implants per female in the control group.
Les effets létaux dominants (LD) causent la mort embryonnaire ou foetale. L’induction d'un événement létal dominant après exposition à une substance d'essai (liquide, solide, vapeur ou gaz,…) indique que la substance a affecté le tissu germinal des espèces d'essai. Les effets létaux dominants sont souvent le résultat des aberrations chromosomiques (anomalies structurales et numériques), mais les mutations géniques et les effets toxiques ne peuvent pas être exclus.
Cette Ligne directrice recommande des rats ou des souris comme espèces d'essai. Généralement, des mâles sont exposés à la substance d'essai et accouplés aux femelles vierges non traitées. Le moyen le plus employé est l'administration unique de la substance d'essai par voie orale ou par injection intrapéritonéale. Normalement, trois niveaux de dose devraient être employés. Les différentes étapes de la formation des cellules germinales peuvent être testées séparément en employant différents intervalles d'accouplement. Les femelles sont sacrifiées après une période appropriée, et le contenu des utérus est examiné pour déterminer les nombres d'implants et d'embryons vivants et morts. Le calcul de l'effet létal dominant repose sur la comparaison du nombre d'embryons implantés vivants par femelle dans le groupe traité et dans le groupe témoin.
This Test Guideline includes two methods: a paper contact toxicity test and an artificial soil test. The recommended specie is Eisenia foetida (Michaelsen).
The initial screening test (filter paper contact test) involves exposing earthworms to test substances on moist filter paper in order to identify potentially toxic chemicals to earthworms in soil. Five or more treatment levels in a geometric series and, at least, ten replicates (one worm per vial) for each treatment should be used. Tests are done in the dark and for a period of 48 hours. The artificial soil test gives toxicity data more representative of natural exposure of earthworms to chemicals. It involves keeping earthworms in samples of a precisely defined artificial soil. Five concentrations, in a geometric series, of the test substance have been applied. One concentration resulting in no mortality and one resulting in total mortality should be used. Four replicates for each treatment are recommended. Mortality is assessed 7 and 14 days after application.
The purpose of this Test Guideline is to determine the effects of a substance administered with food to birds.
Birds are fed a diet containing the test substance at a range of concentrations for a period of five days. Two control groups and one treatment group for each of the, at least, five dietary levels of the test substance should be used. Each group consists of 10 birds. The minimum duration of the test is eight days: five days on the test diet followed by a minimum of three days on normal diet. Suitable facilities for holding birds indoors are necessary. These include mechanisms for temperature, humidity and light control as required, as well as pens of suitable capacity for rearing the birds. Mortalities and signs of toxicity are recorded daily. The following observations should be made during the test: signs of intoxication and other abnormal behaviour; mortality; body weights; food consumption.
Cette Ligne directrice inclut deux méthodes : un essai de toxicité par contact sur papier et un essai avec un sol artificiel. L’espèce recommandée est Eisenia foetida (Michaelsen).
L’essai de dépistage initial (essai de contact sur papier filtre) implique d'exposer des vers de terre aux substances d'essai sur papier filtre humide afin d'identifier les produits chimiques potentiellement toxiques pour les vers de terre dans le sol. Cinq doses au moins, choisies dans une série géométrique, et dix répliques au moins (un ver par fiole) pour chaque traitement devraient être employées. Des essais sont faits dans l'obscurité et pendant une période de 48 heures. L'essai avec le sol artificiel fournit des données de toxicité plus représentative de l'exposition naturelle des vers de terre aux produits chimiques. Il implique de maintenir des vers de terre dans les échantillons d'un sol artificiel de composition précisément définie. Cinq concentrations, d'une série géométrique, de la substance d'essai sont appliquées. Une concentration ne provoquant aucune mortalité et une concentration provoquant une mortalité totale devraient être employées. Quatre réplicats pour chaque traitement sont recommandées. La mortalité est relevée les jours 7 et 14 après l’application.
The purpose of this Test Guideline is to determine the effects on the reproduction of a substance administered with food to birds.
Birds are fed a diet containing the test substance in various concentrations for a period of not less than 20 weeks. A minimum of three dietary concentrations of the test substance is required. The maximum recommended test concentration is 1000 ppm. Birds may be kept in pens as pairs (at least 12 pens per test group) or as groups of one male and two or three females (at least 8-12 pens per group). Birds are induced, by photoperiod manipulation, to lay eggs. Eggs are collected over a ten-week period, artificially incubated and hatched, and the young maintained for 14 days. Suitable facilities for rearing birds, preferably indoors, are necessary. Mortality of adults, egg production, cracked eggs, egg shell thickness (at least two eggs from each pen), viability, hatchability and effects on young birds are observed during the study.Le but de cette Ligne directrice est de déterminer les effets d'une substance administrée avec de la nourriture aux oiseaux.
Des oiseaux sont alimentés par un régime contenant la substance d'essai à différentes concentrations pendant une période de cinq jours. Deux groupes de contrôle et un groupe de traitement pour chacun des cinq niveaux (au moins) de concentrations alimentaires de la substance d'essai devraient être employés. Chaque groupe se compose de 10 oiseaux. La durée minimum de l'essai est de huit jours : cinq jours d'alimentation avec la substance d'essai, suivis de trois jours d'alimentation normale. Des équipements appropriés pour l’élevage d’oiseaux en local clos sont nécessaires. Ceux-ci incluent des mécanismes de régulation de la température, de l'humidité et de la lumière au besoin, ainsi que des cages de capacité suffisante pour élever des oiseaux. La mortalité et les signes de toxicité sont enregistrés quotidiennement. Les observations suivantes devraient être faites pendant l'essai : des signes d'intoxication et de tout autre comportement anormal, la mortalité, le poids corporels et la consommation de nourriture.
Le but de cette Ligne directrice est de déterminer les effets sur la reproduction d'une substance administrée avec de la nourriture aux oiseaux.
Des oiseaux sont alimentés par un régime contenant la substance d'essai à différentes concentrations pendant une période de moins de 20 semaines. Un minimum de trois concentrations alimentaires de la substance d'essai est exigé. La concentration maximum d'essai recommandée est de 1000 ppm. Les oiseaux peuvent être répartis dans les cages, soit en couple (au moins 12 cages par groupe d'essai), soit un mâle et deux ou trois femelles (au moins 8-12 cages par groupe) Les oiseaux sont amenés, par modification de la photopériode, à pondre des oeufs. Les oeufs sont rassemblés sur une période de dix semaines, artificiellement incubés et éclosent, et les jeunes sont élevés pendant 14 jours. Les équipements appropriés pour élever des oiseaux, de préférence en local clos, sont nécessaires. On observe la mortalité des adultes, la production d'oeufs, les oeufs fêlés, l'épaisseur de la coquille (au moins deux oeufs de chaque cage), la viabilité, l’éclosabilité et les effets sur de jeunes oiseaux pendant l'étude.
The mouse heritable translocation test detects structural and numerical chromosome changes in mammalian germ cells as recovered in first generation progeny.
The types of chromosome changes detected in this test system are reciprocal translocations. Carriers of translocations and XO-females show reduced fertility which is used to select first generation progeny for cytogenetic analysis. Translocations are cytogenetically observed in meiotic cells at diakinesis metaphase I of male individuals. The test is usually performed by analysis of male first generation progeny. About 500 first generation males per dose level are required. One dose level is tested, usually the highest dose associated with the production of minimal toxic effects, and administered by oral intubation or intraperitoneal injection. A single administration of the test substance or the administration of the test substance on 7 days/week for 35 days, are possible. The test substance can be solid, liquid, vapour or gaseous. For translocation heterozygosity one of two possible methods is used: fertility testing of first generation progeny; or cytogenetic analysis of all male first generation progeny are possible. A test substance producing neither a statistically significant increase in the number of translocations observed for at least one test point, nor a statistically significant, dose-related, increase in the number of translocations observed, is considered non-mutagenic in this system.