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This Test Guideline lists methods for determining the density of liquids and solids, giving only a very succinct description of them. The density of a substance is the quotient of its mass and its volume and is expressed in kg/m3.

Several methods are for liquid substance only: hydrometer, immersed body method (both are buoyancy methods) and oscillating densitometer. These methods are applicable to liquids with a dynamic viscosity below 5 Pa s for hydrometer and oscillating densitometer and below 20 Pa s for immersed body method. The method for solids only is the air comparison pycnometer. The volume of a sample of the solid is measured in air or in an inert gas in a calibrated cylinder of variable volume. After concluding the volume measurement, the sample is weighed. The methods for liquids and solids are the hydrostatic balance (a buoyancy method) and the pycnometer. The dynamic viscosity of liquids to be investigated should not exceed 5 Pa s for hydrostatic balance, and should not be above 500 Pa s for pycnometer.

La substance d’essai est administrée en dose graduée à plusieurs groupes de mâles et de femelles.

Les mâles doivent être traités pendant un minimum de quatre semaines. Les femelles doivent être traitées tout au long de l’étude, soit approximativement 54 jours. Cette Ligne directrice utilise le rat. Il est recommandé que chaque groupe commence avec au moins dix animaux de chaque sexe. Généralement, au moins trois groupes d’essai et un groupe contrôle doivent être utilisés. Des niveaux de dose peuvent être basés sur l'information des essais de toxicité aiguë ou sur des résultats d’études à doses répétées. La substance d'essai est administrée oralement et quotidiennement. L'essai limite correspond à un niveau de dose d’au moins de 1000 mg/kg de poids corporel. Les résultats de cette étude incluent des mesures (pesée, consommation de nourriture/eau) et observations quotidiennes détaillées, de préférence chaque jour en même temps, de même qu’une autopsie générale et l'histopathologie. Les résultats de cette étude de toxicité devraient être évalués en termes d'effets observés, autopsie et résultats microscopiques. En raison de la période courte du traitement du mâle, l'histopathologie du testicule et l'épididyme doivent être pris en compte avec les données de fertilité, lors de l’évaluation des effets reproducteurs mâles.

Cette Ligne directrice liste les méthodes servant à déterminer la densité de liquides et de solides. Elle ne donne qu'une courte description de ces méthodes. La densité d'une substance est le quotient de sa masse par son volume et est exprimée en  kg/m3.
Plusieurs méthodes sont applicables uniquement aux substances liquides : l'aréomètre, la méthode du corps immergé (toutes les deux sont des méthodes de flottabilité) et le densimètre oscillant. Ces méthodes sont applicables aux liquides dont la viscosité dynamique ne doit pas dépasser 5 Pa s dans le cas de l'aréomètre et du densimètre oscillant et 20 Pa s pour la méthode du corps immergé. La méthode pour les solides uniquement est le pycnomètre de comparaison à air. Le volume d'un échantillon du solide dans l'air ou dans un gaz inerte est mesuré dans un cylindre calibré de volume variable. Après quoi l'échantillon est pesé. Les méthodes pour les liquides et solides sont la balance hydrostatique (méthode de flottabilité) et le pycnomètre. La viscosité dynamique des liquides ne doit pas dépasser 5 Pa s dans le cas de la balance hydrostatique et 500 Pa s pour le pycnomètre.

The test substance is administered in graduated doses to several groups of males and females.

Males should be dosed for a minimum of four weeks. Females should be dosed throughout the study, so approximately 54 days. This Test Guideline is designed for use with the rat. It is recommended that each group be started with at least 10 animals of each sex. Generally, at least three test groups and a control group should be used. Dose levels may be based on information from acute toxicity tests or on results from repeated dose studies. The test substance is administered orally and daily. The limit test corresponds to one dose level of at least 1000 mg/kg body weight. The results of this study include measurements (weighing, food/water consumption) and daily and detailed observations, preferably each day at the same time, as well as gross necropsy and histopathology. The findings of this toxicity study should be evaluated in terms of the observed effects, necropsy and microscopic findings. Because of the short period of treatment of the male, the histopathology of the testis and epididymus must be considered along with the fertility data, when assessing male reproductive effects.

This Test Guideline is used in the assessment and evaluation of the toxic effects of organophosporus substances.

Daily doses of the test substance are administered orally (preferably by gavage or administration of gelatin capsules) to domestic laying hens (aged 8 to 12 months) for 28 days. The animals are observed at least daily until 14 days after the last dose. Biochemical measurements are undertaken on hens randomly selected from each group after the last dose. Two weeks after the last dose, the remainder of the hens are killed and histopathological examination is undertaken. The treatment group should contain at least 12 hens. Generally, at least three treatment groups should be used. The highest dose level should be chosen with the aim of inducing toxic effects; thereafter a descending sequence of dose levels should be selected. A limit test may be performed if no effects would be expected at a dose of 1000 mg/kg bw/d. The results of this study include weighing at least once a week, biochemistry (neuropathy target esterase, acetylcholinesterase) and, at least, and detailed observations, as well as gross necropsy and histopathology. The findings of this study should be evaluated in terms of the incidence, severity, and correlation of behavioral, biochemical and histopathological effects and any other observed effects in each of the treated and control groups.

This Test Guidelines describes several methods and devices to determine the temperature or temperature range of the phase transition from the solid to the liquid state or from the liquid to the solid state.

The melting point is defined as the temperature at which the phase transition from the solid to the liquid state at atmospheric pressure takes place. It is considerably affected by impurities. The selection of a particular method depends mainly on the state of physical aggregation of the sample and on whether or not the substance can be pulverized easily, with difficulty, or not at all. The methods are: the capillary/liquid bath, the capillary/metal block, the Kofler hot bar, the melt microscope, the differential thermal analysis and differential scanning calorimetry, the freezing temperature and the pour point.

This Test Guideline describes a method to determine experimentally Pow values in the range log Pow between -2 and 4 (occasionally up to 5). This method can not be used with surface-active materials. The partition coefficient is defined as the ratio of the equilibrium concentrations of a dissolved substance in a two-phase system consisting of two largely immiscible solvents.

The test should be done at a temperature in the range 20 to 25°C, kept constant at ± 1°. There are three runs with different volumes ratio of n-octanol to water. Duplicate vessels containing accurately measured amounts of the two solvents and stock solution are used in all three runs. After agitation the separation of the two phases, in general, is achieved by centrifugation. It is necessary to determine the concentrations of the test substance in both phases. Analytical methods which may be appropriate are: photometry, gas chromatography and high performance liquid chromatography. The total quantity of substance present in both phases should be calculated and compared with the quantity originally introduced. A Pow value is calculated from the data of each run. The six log Pow values should fall within a range of ± 0.3 units.

This Test Guideline describes methods to determine the surface tension (in N/m) of aqueous solutions. The methods are based on the measurement of the force which it is necessary to exert vertically on a stirrup or ring, in contact with the surface of the liquid, in order to separate it from the surface, or on a plate, with an edge in contact with the surface, in order to draw up the film that has formed.

There are four different methods: the plate method, the stirrup method, the ring method and the OECD harmonized ring method. They are described in detail in the ISO Standard 304-1985. The methods described are applicable to aqueous solutions of most substances regardless of their degree of purity. The concentration should be 90% of the saturation solubility, but must below 1g/l. This shall therefore be carried out under a protective cover to avoid interference at 20°C approximately. The ring is immersed below the surface of the solution. Then the table top, where the measurement vessel is placed, is lowered gradually and evenly at a rate of approximately 0.5 cm/min to detach the ring from the surface until the maximum force is reached. The force is read on the tensiometer. After completing the first measurement, measurements are repeated until a constant surface tension value is reached.

The test substance is administered orally in a single dose to domestic hens. The animals are observed for 21 days, then the remainder of the hens are killed and histopathological examination is undertaken.

The young adult domestic laying hen (Gallus gallus domesticus), aged 8 to 12 months, is recommended. The single dosing with the test substance should normally be by the oral route using gavage, gelatine capsules, or a comparable method. The treatment group should contain, at least 12 hens, and the positive control group at least 6 hens. The objective of the preliminary study is to maximize the main study dose. The limit test corresponds to one dose level of at least 2000 mg/kg body weight/day. The dose level of the main study should be high as possible taking into account the results of preliminary study and the maximum dose level (2000 mg/kg bw/d). The results of this study include measurements (weighing), biochemistry (neuropathy target esterase) and, at least, daily and detailed observations, as well as gross necropsy and histopathology. The findings of this study should be evaluated in terms of the incidence, severity, and correlation of behavioral, biochemical and histopathological effects and any other observed effects in the treated and control groups.

This Test Guideline describes methods to determine the water solubility of test substances. The water solubility of a substance is the saturation mass concentration of the substance in water at a given temperature. This guideline addresses the determination of the solubility in water of essentially pure substances which are stable in water and not volatile. Before determining water solubility, it is useful to have some preliminary information on the substance, like structural formula, vapour pressure, dissociation constant and hydrolysis as a function of pH.

The column elution method and the flask method which cover respectively solubilities below and above 10-2 g/l are described. The test is preferably run at 20 ± 0,5 °C. A simple preliminary test is allowed to determine approximately the appropriate amount of sample to be used in the final test, as well as the time necessary to achieve saturation.

Cette Ligne directrice décrit des méthodes pour déterminer le point d’ébullition de substances d’essai. Le point d’ébullition d’un liquide est défini comme la température (en Kelvin) à laquelle la pression de vapeur est égale à la pression atmosphérique standard de 101.325 kPa.

L’influence des impuretés sur le point d’ébullition dépend de la nature de l’impureté. Les méthodes décrites dans cette Ligne directrice peuvent être appliquées à des substances liquides et à bas point de fusion, si toutefois celles-ci ne subissent pas de changement chimique à des températures inférieures au point d’ébullition. Les méthodes sont : l’ébulliomètre, la méthode dynamique, la méthode de distillation, la méthode selon Siwoloboff, la détection photoélectrique, l’analyse thermique différentielle, l’analyse calorimétrique différentielle. La détection photoélectrique et l'analyse thermique permettent de mesurer le point d'ébullition et le point de fusion. La méthode dynamique présente l'avantage de servir aussi à déterminer la pression de vapeur.

Cette Ligne directrice est employée dans l'estimation et l'évaluation des effets toxiques de composés organophosphorés.

Des doses quotidiennes de la substance d’essai sont administrées oralement (de préférence par gavage ou via des gélules de gélatine) à des poules pondeuses domestiques (âgées de 8 à 12 mois) pendant 28 jours. Les animaux sont observés au moins quotidiennement jusqu’à 14 jours après la dernière dose. Des mesures biochimiques sont entreprises sur des poules choisies de façon aléatoire parmi chaque groupe après la dernière dose. Deux semaines après la dernière dose, le reste des poules est tué et l'examen histopathologique est entrepris. Le groupe de traitement devrait contenir au moins douze poules. Généralement, au moins trois groupes de traitement devraient être employés. Le niveau de la dose la plus élevée devrait être choisi dans le but d'induire des effets toxiques ; ensuite un ordre décroissant des niveaux de dose devrait être choisi. Un essai limite peut être réalisé si aucun effet n’est prévu à une dose de 1000 mg/kg pc/j. Les résultats de cette étude incluent une pesée au moins une fois par semaine, de la biochimie (estérase neurotoxique, acétylcholinestérase) et des observations détaillées, de même qu’une autopsie générale et de l'histopathologie. Les résultats de cette étude devraient être évalués en termes d'incidence, sévérité, et corrélation des effets comportementaux, biochimiques et histopathologiques et de tous les autres effets observés dans chacun des groupes traités et de contrôle.

This Test Guideline describes methods to determine the boiling point of test substances. The boiling point of a liquid is defined as the temperature (in K) at which the vapour pressure equals the standard atmospheric pressure 101.325 kPa.

The influence of impurities on the boiling point depends greatly upon the nature of the impurity. The methods described in this Test Guideline can be applied to liquid and low-melting substances, provided that they do not undergo chemical change below the boiling point. The methods are: the ebulliometer, the dynamic method, the distillation method, the method according to Siwoloboff, the photocell detection, the differential thermal analysis, the differential scanning calorimetry. The photocell detection and thermal analysis permit the determination of boiling as well as melting temperatures. The dynamic method has the advantage that it can also be applied to the determination of the vapour pressure.

Cette Ligne directrice décrit des méthodes pour déterminer la tension superficielle (en N/m) des solutions aqueuses. Les méthodes sont basées sur la mesure de la force qu'il est nécessaire d'exercer verticalement sur un étrier ou un anneau, en contact avec la surface du liquide, afin de le séparer de la surface, ou d'un plat, dont un bord est en contact avec la surface, afin d'arracher le film formé.

Il y a quatre méthodes différentes : la méthode de la plaque, la méthode de l'étrier, la méthode de l'anneau et la méthode de l'anneau harmonisée de l'OCDE. Elles sont décrites en détail dans la norme ISO 304-1985. Les méthodes décrites s'appliquent aux solutions aqueuses de la plupart des substances indépendamment de leur degré de pureté. La concentration doit être 90% de la solubilité à saturation, mais doit être au-dessous de 1g/l. Ceci sera donc effectué sous un dispositif de couverture pour éviter des interférences à 20°C environ. L'anneau est immergé en dessous de la surface de la solution. Alors, le porte échantillon, sur lequel est posé le récipient, est abaissé graduellement et à une vitesse constante d'approximativement 0.5 cm/min pour détacher l'anneau de la surface jusqu'à ce que la force maximum soit atteinte. La force est lue sur le tensiomètre. Après exécution de la première mesure, des mesures sont répétées jusqu'à ce qu'une valeur constante de tension superficielle soit atteinte.

Cette Ligne directrice décrit des méthodes pour déterminer la solubilité dans l’eau des substances d’essai. La solubilité d’une substance dans l’eau est sa concentration de saturation dans l'eau à une température donnée. Cette Ligne directrice porte sur la mesure de la solubilité de substances essentiellement pures, stables dans l'eau et non volatiles. Avant de déterminer la solubilité, il est utile de disposer d'informations sur la substance telles que la formule développée, la pression de vapeur, la constante de dissociation et l'hydrolyse en fonction du pH.

La méthode par élution sur colonne et la méthode du flacon, couvrent respectivement les solubilités inférieures et supérieures à 10-2 g/l. L’essai est pratiqué de préférence à 20 ± 0,5°C. Un essai préliminaire simple permet de déterminer approximativement la quantité de substance à utiliser dans l'essai proprement dit, ainsi que le temps nécessaire pour atteindre la saturation.

La substance d’essai est administrée oralement par une dose unique à des poules domestiques. Les animaux sont observés pendant 21 jours, puis le reste des poules est tué et l'examen histopathologique est entrepris.

La jeune poule pondeuse domestique adulte (Gallus gallus domesticus), âgée 8 à 12 mois, est recommandée. Le dosage unique avec la substance d'essai devrait normalement s’effectuer par voie orale via un gavage, des gélules, ou une méthode comparable. Les groupes d’essai devraient contenir au moins douze poules, et le groupe de contrôle positif au moins six poules. L’objectif de l’étude préliminaire est de maximiser la dose de l’étude principale. L’essai limite correspond à une dose unique d’au moins 2000 mg/kg poids corporel/jour. Le niveau de dose de l’étude principale devrait être aussi élevé que possible en prenant en compte les résultats de l’étude préliminaire et du niveau de dose maximum (2000 mg/kg pc/j). Les résultats de l’étude incluent des mesures (poids), de la biochimie (estérase neurotoxique) et des observations quotidiennes détaillées, de même qu’une autopsie générale et de l’histopathologie. Les résultats de cette étude devraient être évalués en termes d'incidence, sévérité, et corrélation des effets comportementaux, biochimiques et histopathologiques et de tous les autres effets observés dans les groupes traités et de contrôle.

Cette Ligne Directrice décrit une méthode pour déterminer expérimentalement la valeur du coefficient de partage (n-octanol/eau) (Poe), lorsque son logarithme décimal est compris entre -2 et 4 (et quelquefois 5). Cette méthode n'est pas applicable aux substances tensio-actives. Le coefficient de partage est défini comme le rapport des concentrations d'équilibre d'une substance dissoute dans un système à deux phases constitué de deux solvants pratiquement immiscibles.

L'essai doit être conduit à une température comprise entre 20°C et 25°C, maintenue constante à ± 1°C. On effectue trois essais avec des pourcentages n-octanol/eau différents. Pour chacun des trois essais, on préparera en double les récipients d'essai contenant des quantités exactement mesurées des deux solvants et de la solution mère. Après agitation, les deux phases sont généralement séparées par centrifugation. Il est nécessaire de déterminer les concentrations de la substance d'essai dans les deux phases. Les méthodes analytiques susceptibles de convenir sont la photométrie, la chromatographie en phase gazeuse et la chromatographie liquide à haute performance. La quantité totale de la substance dans les deux phases doit être calculée et comparée à la quantité introduite au départ. Les résultats de chaque essai permettent de déduire une valeur de Poe. Les six valeurs du log Poe doivent s'inscrire dans un intervalle de ± 0,3 unités.

Cette Ligne directrice décrit plusieurs méthodes et dispositifs pour déterminer la température ou l’intervalle de températures de la transition de la phase solide à la phase liquide ou vice-versa.

Le point de fusion est défini comme la température à laquelle se produit le changement de la phase solide à la phase liquide à la pression atmosphérique. Ceci est considérablement affecté par les impuretés. La sélection d’une méthode particulière dépend principalement de l'état d'agrégation physique de l'échantillon et de la capacité de la substance à être facilement, difficilement ou non pulvérisable. Les méthodes présentées sont : le tube capillaire dans un bain liquide, le tube capillaire dans un bloc métallique, le banc chauffant de Kofler, le microscope à fusion, l’analyse thermique différentielle, l’analyse calorimétrique différentielle, le point de congélation, et le point d’écoulement.